【中文名稱】：偽狂犬病毒gE2.0抗體診斷試劑盒
【產(chǎn)品規(guī)格】：96T/48T。
【保存條件】：2-8℃低溫保存
【保質(zhì)期】：6個月，所有試劑盒均提供批次。
預期用途：定性檢測豬血清/血漿中抗偽狂犬病毒gE蛋白抗體，適用于豬場野毒感染篩查、疫苗免疫效果評估、偽狂犬病凈化監(jiān)測。
檢測原理：采用間接ELISA法，酶標板預包被重組gE蛋白抗原，若樣本中存在gE抗體，會與板上抗原結(jié)合，后續(xù)通過HRP標記二抗顯色，顏色深淺與抗體含量正相關(guān)。
樣本采集與預處理
樣本類型：豬血清、血漿（EDTA/檸檬酸鈉抗凝）。
采集方法：全血3000~4000r/min離心10分鐘分離血清，要求血清清亮無溶血、無細菌污染，避免反復凍融。
保存條件：樣本采集后2~8℃可保存1周，-20℃可長期保存，長期保存需分裝避免反復凍融。
樣本稀釋：待檢血清用樣本稀釋液按1:10比例預稀釋（如90μL稀釋液+10μL血清），充分混勻后備用。
四、操作步驟
試劑準備
試劑盒提前從冷藏環(huán)境取出，室溫平衡至少30分鐘，所有試劑充分搖勻后使用。
濃縮洗滌液用蒸餾水/去離子水按1:20比例稀釋（如10mL濃縮液+190mL水），若低溫下有結(jié)晶析出，可37℃水浴助溶后使用。
根據(jù)實驗所需數(shù)量取出酶標板條，未使用的板條立即放回自封袋密封，2~8℃保存。
加樣與孵育
設(shè)置空白對照1孔（僅加100μL樣本稀釋液）、陰性對照2孔、陽性對照2孔，其余為樣本孔。
陰、陽性對照孔直接加入對應(yīng)對照血清100μL；樣本孔加入90μL樣本稀釋液+10μL預稀釋后血清（樣本最終稀釋比例為1:100），充分混勻。
貼好封板膜，37℃恒溫避光孵育30分鐘（推薦使用水浴箱或濕盒，避免液體蒸發(fā)）。
洗滌
揭去封板膜，甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿工作洗滌液，靜置30秒后甩干，重復洗滌5次，最后一次在吸水紙上拍干，確保無殘留液體。
使用自動洗板機時，每孔注入350μL洗滌液，浸泡1分鐘后洗滌，結(jié)果更穩(wěn)定。
加酶標二抗
除空白孔外，每孔加入100μL HRP標記二抗，貼好封板膜，37℃恒溫避光孵育30分鐘。
重復步驟3的洗滌操作。
顯色與終止
每孔依次加入TMB底物液A、B各50μL，輕輕振蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘，此時陽性孔會逐漸變?yōu)樗{色。
每孔加入終止液50μL，溶液由藍色變?yōu)辄S色，終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。
讀數(shù)
酶標儀以空白孔調(diào)零，檢測450nm波長處各孔OD值（推薦用630nm作為參比波長，減少板底劃痕干擾）。
結(jié)果判定
實驗有效性判斷
陽性對照平均OD值≥0.6，陰性對照平均OD值≤0.10，實驗結(jié)果有效。
若對照結(jié)果不符合上述要求，需重新進行實驗。
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